背景：世界上大约有2.92亿人感染了乙型肝炎病毒(HBV)，在非洲和西太平洋地区观察到的感染率最高，那里的病毒携带率> 6% 。中国是一个重灾区，HBV携带者约占中国总人口的6%。目前，乙型肝炎的诊断主要基于HBV-DNA核酸检测、HBV血清标志物检测、肝功能检测和其他辅助检测。最新版本的欧洲HBV治疗指南[3]规定，只有当HBV-DNA和肝功能指标(如丙氨酸氨基转移酶[ALT])都升高时，才符合治疗标准。低水平HBV-DNA复制的检测依赖于肝活检，肝活检是侵入性的，患者难以接受，并且不能重复用于治疗效果监测。

外泌体是包含复杂RNA、DNA和蛋白质的小(40-200nm)囊泡，由细胞内囊泡和质膜通过多个囊泡体融合和胞吐形成，最早由Caby等人在人类中检测到。外泌体主要通过受体介导的靶细胞内吞作用促进细胞相互作用。由于其双分子脂质层的结构，外泌体不能被体液中发现的酶降解。因此，外泌体携带的蛋白质、病毒、核酸和其他物质不会在体液中发现。这些特征有助于在疾病的所有阶段甚至早期阶段轻松隔离和检测。因此，外泌体可以成为病毒复制、传播和调节的媒介。在反映疾病的发生、发展和结果方面，外泌体可能是比血清标志物更敏感的指标，并可能提供更具临床意义的治疗参考指标。

目的：基于这一假设，本研究旨在检测外源性HBV-DNA水平的敏感性及其与HBV感染血清生化指标的相关性。

方法：根据欧洲肝脏分类研究协会对患者进行分组(1: HBV-DNA阳性CHB，正常丙氨酸氨基转移酶[ALT]；2 : H B VDNA阳性CHB，ALT升高；3: HBV-DNA阴性HBeAb阳性CHB，ALT正常；4: HBV-DNA阳性HBeAg阴性HBeAb阳性CHB，ALT升高；5:HBV DNA阴性，HBcAb阳性；6 : HBV阴性，ALT正常)。分离外泌体，比较分析外泌体和血清HBV-DNA。

结果：第1、2和4组的外源性的HBV-DNA含量低于血清中的含量(均P < 0.05)。在血清HBV-DNA阴性的组(组3和组5)中，外源性HBV-DNA水平高于血清HBV-DNA水平(均P < 0.05)。在第2组(R2 = 0.84)和第4组(R2 = 0.98)中，外泌体和血清HBV-DNA水平是相关的。第5组的外源性HBV-DNA水平与总胆红素(R2 = 0.94)、直接胆红素(R2 = 0.82)、间接胆红素(R2 = 0.81)相关(均P < 0.05)。

图1:血清中外来体的鉴定。(a和b)在电子显微镜下，血清中的外来体显示出大小约为30-95nm的囊泡状碟形结构。(c)在将血清外来体转染入HepG2细胞24小时后，在细胞质中观察到颗粒荧光。(d)纳米颗粒的纳米颗粒追踪分析(NTA)。(e)通过蛋白质印迹检测外来体表面蛋白的表达。β-肌动蛋白用作加载对照。(f)三名患者外来体表面蛋白质标记表达的相对强度。

图2:HBV-DNA在六组血清样品的外来体中的表达。qPCR检测六组血清样本中外来体HBV-DNA的绝对拷贝数。*P < 0.05。

图3:血清HBV-DNA阴性患者血清和外来体之间的HBV-DNA的比较。(a)第3组患者血清和外来体中HBV-DNA的拷贝。(b)第5组患者血清和外来体中HBV-DNA的拷贝。*P < 0.05。

图4:在血清HBV-DNA阳性的患者中，血清和外来体之间的HBV-DNA的比较和相关性(皮尔逊)。(a)第一组。第二组。第四组。*P < 0.05。

图5:外源HBV-DNA与肝功能指标的相关性。总胆红素(TBIL)。直接胆红素。间接胆红素。

结论：在血清HBV-DNA阴性的慢性乙型肝炎患者中，可以检测到外源性HBV-DNA，并可用于监测治疗效果。外源性HBV-DNA可用于高度怀疑HBV感染但血清HBV-DNA阴性的患者。

原文出处： Xu X,  Zhang L,  Liu J,et al.Exosomal HBV-DNA for diagnosis and treatment monitoring of chronic hepatitis B.Open Life Sci 2023;18(1)