非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是慢性肝病的主要病因。该病特征显著，包括肝脏内脂肪积聚、脂肪变性、脂质代谢失衡等。尽管临床上对NAFLD发病机制的认知不断深化，然鉴于其发病机制的复杂性和高度的异质性，当前亟需研发出能够针对NAFLD多种病理生理机制的临床药物，以应对日益增长且迫切的医疗需求。

近年来，随着医学研究的深入，中医药通过循证医学方法在治疗NAFLD的临床实践及基础研究领域取得了显著进展。消脂方（XZF）是一种针对NAFLD设计的实用型中草药方剂，其临床疗效已获初步认可，但其具体的作用机制尚待进一步阐明。

近日，一篇名为“Xiaozhi formula attenuates non-alcoholic fatty liver disease by regulating lipid metabolism via activation of AMPK and PPAR pathways”的文章探讨了XZF对NAFLD的相关作用。

图1 论文首页

XZF改善HFD诱导NAFLD小鼠的体重和脂肪积累

研究将C57BL/6J小鼠随机分为五组，分别接受正常饮食（NCD）或HFD（高脂饮食）喂养8周。随后，给药组接受HFD联合XZF或HFD联合瑞舒伐他汀（RSV）治疗8周，而HFD组则继续HFD和生理盐水喂养8周，NCD组则维持NCD和生理盐水喂养8周（图2A）。一段时间后，五组小鼠的体重增长曲线存在显著差异。至实验第五周，HFD喂养的小鼠体重显著高于NCD喂养的小鼠。经8周治疗后，HFD+XZF-H组和HFD+RSV组小鼠的体重较HFD组显著降低（图2B）。此外，HFD+XZF-H组和HFD+RSV组小鼠的体型较HFD组更为瘦削（图2C）。

为探讨XZF诱导的体重减轻是否与食物摄入量相关，该研究每周记录了小鼠的食物摄入情况。结果显示，各组小鼠之间的体重差异与食物摄入量无显著关联（图2D）。此外，与NCD组相比，HFD喂养显著增加了小鼠的肝脏和白色脂肪重量。然而，高剂量的XZF和RSV治疗有效减轻了这一影响（图2E、F）。

图2 XZF可改善HFD诱导的NAFLD小鼠的体重和脂肪积累

XZF减轻HFD引起的肝脂肪变性并防止脂质积聚

为科学评估XZF对由HFD诱导的肝损伤的治疗效果，研究对血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）的水平进行了检测。结果显示，在给予XZF后，血清ALT水平显著降低，而血清AST水平则保持稳定（图3A）。

同时，研究采用了HE染色评估肝组织及白色脂肪细胞内的脂肪变性程度；油红O染色量化肝组织内脂滴的积聚情况。HE染色结果显示，经过8周的XZF处理后，NAFLD小鼠的肝损伤及肝脂肪变性均有所减轻（图3B）。同时，油红O染色测定结果也进一步证实了XZF在改善肝脏脂质积聚方面的积极作用（图3C）。

此外，与NCD组相比，HFD组小鼠的白色脂肪细胞体积显著增大，这在一定程度上反映了脂质代谢的紊乱。然而，给予XZF治疗后，这种脂肪细胞增大的现象得到了有效缓解（图3D）。

因此，XZF能够显著减轻NAFLD小鼠的肝脏脂肪变性，并有效防止脂质在肝脏中的积聚，从而为NAFLD的潜在治疗策略提供了新的视角和依据。

图3 XZF可缓解HFD诱导的肝脂肪变性和脂质积聚

XZF改善NAFLD小鼠的脂质和葡萄糖代谢

鉴于高脂血症、肥胖及胰岛素抵抗为NAFLD的主要伴随疾病，该研究进一步探讨了高剂量XZF对NAFLD小鼠脂质与葡萄糖代谢的具体影响。结果显示，HFD喂养显著提升了血清及肝脏中的总胆固醇（TC）与甘油三酯（TG）含量，而XZF则显著降低了这些升高的脂质水平（图4A）。

此外，16周的HFD处理促进了血清低密度脂蛋白（LDL-C）的上升，但高密度脂蛋白（HDL-C）水平并未发生显著变化。且XZF对于LDL-C与HDL-C水平的变化并未产生显著影响（图4B）。另一方面，XZF在改善HFD诱导的高禁食及随机血糖水平方面亦表现出明显优势（图4C）。为进一步确认XZF对胰岛素稳态的潜在益处，研究采用了腹腔胰岛素耐量试验（IPITT）与腹腔注射糖耐量试验（IPGTT）进行评估。结果表明，XZF处理能够有效改善NAFLD小鼠的胰岛素抵抗状况（图4D、E）。这些发现有力地支持了XZF在改善NAFLD小鼠全身脂质与葡萄糖代谢方面具有积极作用。

图4 XZF改善NAFLD小鼠的脂质和葡萄糖代谢

XZF预防HFD诱导的肝细胞氧化损伤

相较于NCD组，HFD组显著提升了小鼠肝脏中的FFA水平，而这一现象在高剂量XZF治疗后得到了有效缓解（图5A）。此外，XZF还显著降低了HFD小鼠血清及肝组织中丙二醛（MDA）的含量，MDA是NAFLD脂质过氧化的最终产物，其水平的降低进一步证实了XZF的治疗效果（图5B）。

研究进一步探讨了XZF对肝脏氧化损伤的影响。结果显示，与NCD喂养的小鼠相比，HFD喂养的小鼠体内超氧化物歧化酶（SOD）的活性显著降低，而经过XZF处理后，SOD的活性得到了恢复（图5C）。值得注意的是，细胞色素P450 2E1（CYP2E1）作为ROS的主要来源之一，在NAFLD中氧化应激的调节过程中扮演着重要角色。通过RT-qPCR和蛋白质印迹分析，研究发现HFD喂养增强了CYP2E1的mRNA和蛋白质表达水平，而XZF的给药则可能潜在地抑制了这一过程（图5D、E）。

这些研究结果充分表明，XZF能够有效保护NAFLD小鼠免受HFD诱导的氧化损伤。

图5 XZF可防止HFD诱导的肝细胞氧化损伤

XZF通过AMPK和PPAR途径重塑参与脂质代谢的肝脏基因表达

为了深入探究XZF在脂肪酸代谢调控中的潜在分子机制，研究采用RT-qPCR技术检测了肝组织中与脂质合成相关的基因表达水平，结果显示，XZF处理显著降低了FASN的mRNA水平，而对SREBP-1c的降低作用虽存在但未达到统计显著性（图6）。此外，模型小鼠的ACOX1、CPT-1和PPARα的mRNA水平均呈现下调趋势，而XZF干预则显著提升了这些基因在肝组织中的表达。

该研究还检测了肝脏中AMPK、磷酸化AMPK（p-AMPK）、PPARα、CPT-1以及PPARγ的蛋白表达水平来解析XZF在HFD诱导的脂质代谢紊乱中的调控机制。结果表明，HFD组的AMPK、PPARα和CPT-1的磷酸化水平受到抑制，而XZF处理则显著提升了这些蛋白在HFD+XZF-H组中的表达。此外，与未处理的HFD组相比，XZF还降低了PPARγ的蛋白水平。

综上所述，研究表明XZF通过AMPK和PPAR途径对脂质代谢进行调控，这提示AMPK和PPAR途径可能是XZF在NAFLD治疗中的潜在靶点。

图6 XZF激活AMPK/PPAR信号通路以调节参与脂质代谢的肝脏基因表达

结论

该研究证明了XZF能够通过AMPK和PPAR信号通路的激活与调节，对肝细胞脂质代谢产生积极影响，从而有效预防NAFLD的进一步恶化。为NAFLD的治疗提供了新的、潜在的、有价值的策略，有望成为该疾病治疗领域的重要突破。

参考文献：

You L, Wang T, Li W, Zhang J, Zheng C, Zheng Y, Li S, Shang Z, Lin J, Wang F, Qian Y, Zhou Z, Kong X, Gao Y, Sun X. Xiaozhi formula attenuates non-alcoholic fatty liver disease by regulating lipid metabolism via activation of AMPK and PPAR pathways. J Ethnopharmacol. 2024 Jul 15;329:118165. doi: 10.1016/j.jep.2024.118165